抑制14-3-3ξ表达的siRNA及其重组腺相关病毒载体的构建

• 作者: 曹以诚 杨磊 袁亚丽 高强
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 14-3-3ξ 腺相关病毒 AAV0293细胞 EGFP Western-Blot
• 年，卷（期）: 2011,（23）
• 所属期刊栏目: 动物科学·饲料科学
• 页码范围: 14120-14122
• 分类号: S132
• 字数: 3596字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2011.23.086

摘要

[目的]通过构建靶向14-3-3ξ的siRNA及其报告基因EGFP的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的腺相关病毒.[方法]设计靶向14-3-3ξ的siRNA,插入到psiRNA质粒H1启动子下游,Western-Blot检测siRNA的抑制效果.从psiRNA质粒上扩增H1-si￡基因表达单位亚克隆到AAV表达质粒AAV-MCS-EGFP的Mlul酶切位点,构建重组质粒pAAV-14-3-3ζ-EGFP.重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-14-3-3ζ-EGFP.重组病毒感染HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的EGFP表达.[结果]通过酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-14-3-3ζ-EGFP已构建成功.病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒成功包装.[结论]成功包装出重组腺相关病毒AAV-14-3-3ξ-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行14-3-3￡相关的体内、外研究提供了试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨磊	华南理工大学生物科学与工程学院	74	714	17.0	23.0
2	曹以诚	华南理工大学生物科学与工程学院	48	156	7.0	10.0
3	高强	华南理工大学生物科学与工程学院	13	43	3.0	6.0
4	袁亚丽	华南理工大学生物科学与工程学院	1	1	1.0	1.0