annexinA2基因片段的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘朝奇 汪龚泽 聂纪芹
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人源annexinA2基因片段 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 67-70
• 分类号: R392
• 字数: 3455字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.01.015

摘要

目的:构建人源annexinA2基因片段的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体.方法:从GenBank(BC093056.1) 中获得人源annexinA2基因的cDNA序列并根据不含信号肽的编码序列设计引物,用PCR的方法扩增编码annexinA2基因部分序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达annexinA2的蛋白.表达的蛋白产物利用切胶回收的方法纯化,用His抗体进行Western blot 鉴定.用纯化的目的蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得annexinA2的抗血清,通过ELISA测定兔多克隆抗体的滴度.在CaSki细胞内采用细胞免疫荧光(CIF)和流式细胞术(FCM)检测内源annexinA2蛋白的表达,用于鉴定制备的多克隆抗体特异性.结果:通过双酶切及测序证实原核表达质粒pET28a(+)-annexinA2构建成功,可在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导高表达,得到相对分子质量约28 000的annexinA2蛋白.纯化的蛋白免疫日本大白兔后,产生特异的高滴度的抗体(ELISA 滴度达 1:640 000).CIF和 FCM 结果显示抗血清与肿瘤细胞表达的annexinA2有高度特异的结合活性.结论:构建了annexinA2的原核表达质粒并获得高纯度的蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的多克隆抗体,为人源annexinA2蛋白的生物学功能及肿瘤治疗的研究提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
2	汪龚泽	三峡大学分子生物学研究所	8	16	2.0	4.0
3	聂纪芹	三峡大学分子生物学研究所	4	12	1.0	3.0