T7噬菌体DNA的提取及其反向遗传拯救方法的建立

• 作者: 侯继波 徐海 王义伟 郑其升 陈瑾
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: T7噬菌体 DNA提取 电转化 反向遗传拯救
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 355-358
• 分类号: S432.4+1
• 字数: 3486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.02.022

摘要

从T7噬菌体培养液中粗提噬菌体颗粒,经热裂解后用苯酚、氯仿抽提进而获得纯净的T7噬菌体DNA.用PCR、酶切法鉴定T7噬菌体DNA的完整性.通过对不同感受态细菌浓度、T7噬菌体DNA用量、电转化电压条件的优化,建立了T7噬菌体反向遗传拯救方法.结果显示,提取的DNA结构完整,能够被特异性酶切割,多克隆位点序列正确.T7噬菌体的反向遗传拯救方法最优化条件为200 ng T7噬菌体DNA、1 ml 5×109感受态细菌、1.5 kV电转化电压,在此条件下获得的拯救效率为3.5×105 PFU/ng (DNA).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯继波	江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心	66	346	10.0	16.0
2	徐海	江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心	89	527	12.0	16.0
3	王义伟	江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心	4	6	2.0	2.0
4	郑其升	江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心	19	47	3.0	6.0
5	陈瑾	江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心	3	5	2.0	2.0