牛副流感病毒3型HN基因原核表达及间接ELISA方法建立

• 作者: 任亚超 侯喜林 周玉龙 朱战波 朴范泽 李森 王密 耿晶
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛副流感病毒3型 HN蛋白 原核表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-28
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

用构建的HJ-1株牛副流感病毒3型HN基因原核表达载体pQE30-HN,在E.coli XL1Blue中表达了重组HN蛋白,并用电洗脱方法从电泳凝胶中纯化了该重组蛋白作为包被抗原,建立了检测该病毒抗体的ELISA方法.建立的ELISA最佳工作条件分别是:抗原浓度为6μg/mL,血清稀释度为1:50,封闭液为5％脱脂奶粉,封闭条件为37℃60min,酶标抗体工作浓度为1:10 000;阳性临界值为OD450≥0.30.该方法与病毒中和试验符合率高达96％,板内和板间重复性试验变异系数均小于10％,重复性较好.该方法与牛冠状病毒、传染性鼻气管炎病毒和呼吸道合包体病毒阳性血清无交叉反应.应用该方法检测黑龙江省部分地区323份奶牛血清样本,对牛副流感病毒3型抗体血清阳性率为57.89％.该ELISA方法的成功建立为进一步研发ELISA试剂盒提供了技术基础.