单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析

• 作者: 付宝权 李克生 杜丽娟 杜惠芬 胡永浩 连晓雯
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 单增李氏杆菌 溶血素 hlyA基因 原核表达 可溶性蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 页码范围: 189-193
• 分类号: S85
• 字数: 3802字
• 语种: 中文

摘要

对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化.根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带.连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21 (DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA.IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性.PCR扩增的hlyA基因全长约1600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS- PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式.成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付宝权	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病痛原生物学国家重点实验室	22	29	3.0	4.0
2	李克生	甘肃省医学科学研究院医学生物中心	35	92	5.0	8.0
3	杜惠芬	甘肃省医学科学研究院医学生物中心	27	77	5.0	8.0
4	连晓雯	甘肃省医学科学研究院医学生物中心	15	41	3.0	6.0
5	胡永浩	甘肃农业大学动物医学院	96	391	9.0	16.0
6	杜丽娟	甘肃农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0