表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定

• 作者: 周艳君 姜一峰 孙晶 张善瑞 徐彦召 朱建平 王亚欣 童光志 童武 虞凌雪 陈焕春
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合症病毒 O型口蹄疫病毒 感染性分子克隆 重组病毒
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 1431-1440
• 语种: 中文

摘要

以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆(rHuN4-F 112)作为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV) VP1基因的421～480nt(141～160aa)和598～639nt(200～213aa)两优势保护性抗原表位串联成的目的基因,通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508～532位缺失区域,经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36h,将上清接种至MARC-145细胞中培养,并在MARC-145细胞中连续传代,拯救重组病毒.经RT-PCR扩增,Mlu Ⅰ 酶切及测序验证,结果表明插入的外源基因及人为突变的MluⅠ分子标记都正确,说明重组病毒拯救成功,且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代,将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O/VP1ep.rPRRSV-F112-O/VP1ep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达.经过生物学特性分析,该病毒的TCID50=-log10-6.75/0.1 mL,且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-F112(△508-532)相似,但明显高于rHuN4-F112病毒.