家蝇几丁质酶基因的序列分析、克隆和诱导表达

• 作者: 付萍 吴建伟 吴沁怡 国果 张勇
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 家蝇 几丁质酶 序列分析 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 570-573
• 分类号: R37
• 字数: 2786字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.06.011

摘要

目的 对EST筛选得到的家蝇几丁质酶Ⅰ(MDC Ⅰ)基因进行序列分析,克隆其eDNA序列并在大肠杆菌中表达.方法 采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MDC Ⅰ基因,对其进行序列测定和分析.以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR方法对MDC Ⅰ基因进行扩增,以pET 28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果 MDC Ⅰ基因全长751 bp,编码251个氨基酸,理论分子量28,62家kDa;等电点5.78,有1个chitinase 18家族的活性位点.构建了具有正确基因序列的MDCⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21( DE3)中表达.结论 MDCⅠ基因可在原核表达系统中表达,为进一步研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	国果	贵阳医学院寄生虫学教研室	62	450	11.0	16.0
2	吴建伟	贵阳医学院寄生虫学教研室	83	698	14.0	21.0
3	付萍	贵阳医学院寄生虫学教研室	46	282	9.0	12.0
4	张勇	贵阳医学院寄生虫学教研室	20	134	6.0	11.0
5	吴沁怡	贵阳医学院寄生虫学教研室	7	14	2.0	3.0