fat-1基因脂肪组织特异性表达载体的构建及其山羊转基因细胞系的建立

• 作者: 刘星 张瑾 张运海 李运生 桂涛 章孝荣 陈建文
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不饱和脂肪酸脱氢酶 脂肪组织特异性表达 脂肪酸结合蛋白4启动子 转基因山羊 标记去除
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 746-750
• 分类号: S827
• 语种: 中文

摘要

旨在构建一种筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的载体,将其转染山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定整合fat-1基因的转基因细胞系.首先将人工合成的fat-1基因连接至L28-Wnt10b载体(1种带有小鼠脂肪组织特异性启动子Fabp4的载体)上,构建成fat-1基因脂肪组织特异性表达载体L28-fat1；同时经多次克隆构建成1种筛选标记可全部去除的骨架载体MCS-3s-LoxP-RFP;然后,利用Hind Ⅲ和Not 1对上述2种载体进行双酶切,接着进行连接,构建出筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的表达载体.采用脂质体介导的方法转染山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选转基因细胞.酶切鉴定及PCR检测结果表明,成功构建了3s-LoxP-RFP-FABP4-fat1表达载体,并首次获得了脂肪组织特异性表达fat-1基因的山羊胎儿成纤维转基因细胞系,为将来通过体细胞核移植创制脂肪组织特异表达fat-1基因的优质肉用转基因山羊新材料奠定了基础.