跨膜逆向转运蛋白NHXFS1多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 夏涛 张辉 徐源 郭力榕 黄继斌
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: Na+/H+逆向转运蛋白 原核表达 酵母液泡提取
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 468-474
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

NHXFSI基因是通过DNA家族改组(DNA family shuffling)技术,以拟南芥、水稻和菊花的液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(NHXI)为亲本获得的活性显著增强的新基因.为制备该蛋白的多克隆抗体,对该蛋白进行跨膜结构分析,选取跨膜蛋白的C末端为靶标,并将其克隆到原核表达载体pET32a中,成功构建了原核融合蛋白pET32a-NHXFS1-抗原表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达.通过镍柱亲和层析纯化该融合表达蛋白,获得了纯度约为80％的纯化蛋白,用于免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.ELISA实验表明,该抗体的效价达到1:128 000,提取表达NHXFS1蛋白的酵母液泡经该多克隆抗体Westem blot检测,证明该抗体具有较好的NHXFS1蛋白特异性.NHXFS1多克隆抗体的制备为进一步认识NHXFS1新蛋白结构与功能以及植物耐盐分子生物学的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄继斌		4	6	1.0	2.0
2	张辉		4	6	1.0	2.0
3	郭力榕		4	6	1.0	2.0
4	徐源		4	6	1.0	2.0
5	夏涛		6	41	2.0	6.0