pEGFP-C3/SUMF2重组真核表达载体的构建及在人支气管上皮细胞中的表达

• 作者: 姜晓峰 张婉莹 杨春 梁红艳
• 来源期刊: 中华临床免疫和变态反应杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 硫酸酯酶修饰因子2 真核表达载体 人支气管上皮细胞
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 168-172
• 分类号: R392.11|R562.25
• 字数: 3191字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8705.2012.03.002

摘要

目的 构建与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)真核表达载体.方法 用RT-PCR技术从人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)获得SUMF2的cDNA模板,PCR方法扩增人SUMF2基因.用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增人SUMF2基因及质粒pEGFP-C3;将2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10;挑取菌落培养,提取质粒,酶切鉴定,测序;将测序正确的重组载体用脂质体法转染HBEC,荧光倒置显微镜观察.提取转染细胞的总蛋白进行Western blot检测.结果 扩增出1条约857bp的片段,与预期的SUMF2大小相符.酶切结果显示重组质粒pEGFP-C3/SUMF2被切成2条片段,其中1条为pEGFP-C3载体,另1条为目的 片段.经测序鉴定,序列与GenBank(NM_ 015411.2)中的序列高度同源.荧光倒置显微镜观察显示,人SUMF2基因主要在内质网表达.Western blot结果显示在相对分子质量为37×103处有一蛋白条带,与预期大小相符.结论 成功构建重组表达载体pEGFP-C3/SUMF2,为进一步研究SUMF2对IL-13的作用奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁红艳	哈尔滨医科大学附属第四临床医院检验科	37	152	7.0	10.0
2	姜晓峰	哈尔滨医科大学附属第四临床医院检验科	52	250	9.0	12.0
3	杨春	哈尔滨医科大学附属第四临床医院检验科	7	46	4.0	6.0
4	张婉莹	哈尔滨医科大学附属第四临床医院检验科	5	27	3.0	5.0