人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体构建与在人髓母细胞瘤DAOY细胞中表达

• 作者: 刘汉勇 张石芬 彭全洲 成志强 曾照成 王晓玫 胡锦涛 许静 金红涛 高利昆
• 来源期刊: 临床与实验病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: pEGFP-C2质粒 PRDX3 DAOY细胞 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1325-1328
• 页数: 4页
• 分类号: R73-3|R739.41
• 字数: 3017字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体,并检测其在人髓母细胞瘤DAOY细胞中的表达.方法 从人髓母细胞瘤DAOY细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法对编码PRDX3的基因片段进行扩增,应用基因重组技术,将目的 片段亚克隆到pEGFP-C2真核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定后,用脂质体法将重组质粒转染入DAOY细胞,分别采用RT-PCR法、Western blot法检测PRDX3在DAOY细胞中的表达.结果 双酶切及测序结果验证PRDX3片段正确插入pEGFP-C2质粒,转染后的PRDX3基因mRNA及蛋白质水平均明显上调.结论 成功构建了具有报告基因-增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2-PRDX3,为进一步研究PRDX3基因在人髓母细胞瘤中的生物学功能奠定了基础.