胱天蛋白酶3介导BAG3蛋白剪切的研究

• 作者: 孟欣 张海燕 王华芹 邓娓娓 都镇先
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胱天蛋白酶 BAG3 裂解 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 603-606
• 分类号: R73
• 字数: 2224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0258-4646.2012.07.008

摘要

目的 解析胱天蛋白酶(caspase)3介导BCL2结合抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响.方法 采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在caspase酶切位点；采用定点突变法构建潜在caspase酶切位点突变体；体外翻译野生型和突变型BAG3蛋白；利用重组caspase对野生型或突变型重组BAG3蛋白进行体外剪切实验；构建BAG3裂解片段的真核表达载体,突变型或片段BAG3表达载体转染SW 1990细胞；利用Westemblot检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况；利用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2个潜在caspase酶切位点；caspase3可有效剪切D518A突变型BAG3,而不能剪切D347A突变型BAG3; D518A突变型和野生型BAG3同等程度抑制MG132诱导的细胞凋亡,D347A突变型BAG3对细胞凋亡的保护作用高于D518A突变型或野生型BAG3,而N末端和C末端剪切片段BAG3对MG132诱导的细胞凋亡无作用.结论 caspase3主要在D347位点裂解BAG3蛋白；BAG3在D347位点的剪切使其丧失了原有的抗凋亡作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张海燕	中国医科大学附属第一医院老年病科	70	379	10.0	15.0
2	邓娓娓	中国医科大学附属第一医院老年病科	44	180	6.0	10.0
3	王华芹	中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室	43	249	7.0	14.0
4	孟欣	中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室	25	60	4.0	6.0
5	都镇先	中国医科大学附属第一医院内分泌科	30	163	6.0	10.0