山羊痘病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 姚俊 彭海生 李华春 杨永军 段国军 陈官国 鲁富有
• 来源期刊: 山地农业生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊痘病毒 TaqMan 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 412-419
• 分类号: S855.3|Q789
• 字数: 5659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0457.2012.05.009

摘要

根据GenBank中山羊痘病毒(AY077835) gp063基因DNA序列,应用Beacon Designer7.0软件,设计合成1对引物和1条TaqMan探针,同时制备含有靶DNA序列的pEASY-T1重组质粒标准品.通过引物、探针浓度的筛选及反应条件的优化,建立了山羊痘病毒TaqMan法实时荧光定量PCR.该方法组内和组间重复试验变异系数均低于2％,最低浓度检测极限值为1 ×100 copies/μL,上机检测时间少于40 min.运用该方法对不同时期流行于云南局部的山羊痘临床组织病料进行定量检测,生成的标准曲线斜率(Slope)为-3.36,截距(Intercept)为41.08,相关系数(R2)为0.999 989,阳性对照及送捡样品抽提DNA中病毒含量依次为:P(TK)2.70×105 copies/μL,华坪(HP)毒株1.45×106 copies/μL,景谷(JG)毒株5.12×105 copies/μL,保山(BS)毒株2.96×105 copies/μL,宣威(XW)毒株1.86×105 copies/μL,永胜(YS)毒株1.36×103 copies/μL.结果表明:所建立方法具有灵敏、特异、安全、快速的特点,适合于山羊痘的早期检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李华春	云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室	72	264	8.0	11.0
2	彭海生		14	22	3.0	4.0
3	姚俊	云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室	27	126	7.0	9.0
4	鲁富有		12	20	3.0	4.0