绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析

• 作者: 全鑫 孙虎 杨丽荣 薛保国 赵献林 雷振生
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绿色木霉 几丁质酶基因 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 139-145
• 分类号: S432.1
• 字数: 4369字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0412-0914.2012.02.005

摘要

利用RT-PCR方法从绿木霉ZBS-6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi开放阅读框为1293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性.将该基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21( DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47kD的融合蛋白.该融合蛋白经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi.Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8.表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性.本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础.