小鼠IL-35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘海燕 刘跃均 吴燕 房红莹 胡博 赵李祥
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-35 基因克隆 原核表达 小鼠
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 518-523
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆小鼠白细胞介素-35(IL-35)基因并在大肠杆菌中表达和纯化.方法 用RT-PCR方法从小鼠脾脏扩增出IL-35的两个亚基Ebi3和p35的成熟肽基因片段,采用重叠PCR法将Ebi3基因和p35基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到的融合基因片段先克隆于pMD19-T载体,再亚克隆到表达载体pET-30b(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检测目的蛋白,用Ni螯合层析方法纯化表达产物.结果 从小鼠脾细胞总RNA中扩增出Ebi3和p35的基因片段,重叠PCR法得到的融合基因经鉴定含预期序列；构建的重组表达载体pET-30b(+)-IL-35在BL21(DE3)中经IPTG诱导后表达出约50kd的融合蛋白；Western blot检测结果显示,该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应；经Ni螯合层析方法纯化获得单一蛋白条带.结论 小鼠IL-35在大肠杆菌中表达并纯化,为进一步研究其功能及应用价值奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	房红莹	苏州大学医学部病原生物学系	19	63	5.0	7.0
2	刘跃均	苏州大学附属第一医院血液科	8	20	3.0	4.0
3	赵李祥	苏州大学医学部生物医学研究院	10	19	2.0	4.0
4	刘海燕	苏州大学医学部生物医学研究院	62	177	9.0	10.0
5	吴燕	苏州大学医学部生物医学研究院	17	152	6.0	12.0
6	胡博	苏州大学医学部生物医学研究院	9	14	2.0	3.0