Rac1及其突变体重组腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 康乃馨 张焕相 徐晓静 曲静 朱爱思
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Rac1 腺病毒载体 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 494-498,509
• 分类号: R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建大鼠Rac1及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N腺病毒表达载体,并制备出病毒,为进一步研究Rac1在间充质干细胞(MSCs)迁移中的作用奠定基础.方法 以pMD-19-T-Rac1、pMD-19-T-Rac1Q61L、pMD-19-T-Rac1G12V、pMD-19-T-Rac1T17N为模板,扩增Rac1及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N,酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-Rac1及其突变体重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体,经PacI线性化后转染QBI-293A细胞包装病毒,收获腺病毒重组病毒子,检测病毒滴度并进行间充质干细胞病毒感染复数的鉴定.结果 测序结果显示,Rac1及其突变体Rac1 Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N序列正确,成功包装出重组病毒子后经2～3次扩增得到约为107 pfu/ml高效价重组病毒子,感染间充质干细胞后发现150 MOI为最适病毒感染复数.结论 成功构建了Rac1及其突变体重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1Q61L、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1G12V、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1T17N,获得了Rac1重组病毒子Ad-Rac1、Ad-Rac1Q61L、Ad-Rac1G12V、Ad-Rac1T17N.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲静	苏州大学基础医学与生物科学学院	7	21	3.0	4.0
3	徐晓静	苏州大学基础医学与生物科学学院	13	26	2.0	4.0
5	张焕相	苏州大学基础医学与生物科学学院	29	102	5.0	9.0
7	朱爱思	苏州大学基础医学与生物科学学院	2	22	2.0	2.0
11	康乃馨	苏州大学基础医学与生物科学学院	1	2	1.0	1.0