绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记效果

• 作者: 张勇 张成锋 徐跑 胡鹏晨 苏胜彦 董在杰 袁新华 闻剑旻 陈为先 马佳璐
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 IGF2b 标记效果
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 331-336
• 分类号: S917
• 语种: 中文

摘要

以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因（Green fluorescence protein,GFP）,然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,使用浓度为1μg/μL的质粒与慢病毒表达载体进行连接,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,表明本实验获得的GFP和慢病毒载体整合成功;用此转染293T细胞,通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取RNA,然后按照Fermentas公司的M-MLV操作说明书进行反转录,得到IGF2b基因后加酶切位点进行扩增,将IGF2b整合到用GFP作为标记基因的慢病毒载体上,再以此转染建鲤未分裂的受精卵,48 h后通过荧光显微镜也观察到了绿色荧光蛋白的表达。试验表明绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记是成功的。这些结果为基于含有GFP慢病毒转基因鱼育种技术的开发奠定了基础。