草鱼抗病毒基因Mx全长cDNA的克隆、序列分析与真核表达载体构建

• 作者: 刘莉 刘鹏 吴海丽 江晨 王改改 采克俊 金佳丽
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 Mx基因 克隆 序列分析 载体构建
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 502-508
• 分类号: S917
• 语种: 中文

摘要

Mx蛋白是一类由I型干扰素（IFN）诱导表达的抗病毒蛋白。以PolyI∶C诱导的草鱼（Ctenopharyngodon indellus）肾细胞（CIK cells）为材料,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出Mx基因cDNA全序列,连接至pMD20-T载体上,构建重组质粒pMD20-T-Mx,并测序进行序列分析。用限制性内切酶从克隆的重组质粒pMD20-T-Mx上切下Mx基因,插入到质粒pEGFP-C1中,构建真核表达载体pEGFP-C1-Mx。结果显示,该基因cDNA全序列为1 921 bp,阅读框共编码627个氨基酸,分子量约为71.1 ku,理论等电点pI为8.33,其编码的Mx蛋白具有脊椎动物Mx蛋白共有的结构特征：一个三联体GTP结合区域和一个发动蛋白家族的典型结构特征序列。生物信息学分析表明,草鱼Mx基因所编码的蛋白质以亲水区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,但无明显的核定位序列,空间结构包括N端的GTP酶结构域（GTPase domain）、中间的中央相互作用结构域（central interactive domain,CID）和C端的GTP酶效应结构域（GTPase effector domain,GED）。同源性分析显示,草鱼Mx蛋白氨基酸序列和其他物种的相似性为45.1%～99.7%。此外还成功构建了含草鱼Mx基因cDNA全序列的真核表达载体pEGFP-C1-Mx。研究亮点：首次通过干扰素诱生剂PolyI∶C诱导草鱼肾细胞的方法克隆得到了草鱼抗病毒基因Mx cDNA全序列,并且借助生物信息学软件对其编码的氨基酸进行了序列分析,还成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-Mx,为进一步研究草鱼Mx蛋白的生物学活性及其在抗鱼类病毒性疾病中的应用奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	采克俊	湖州师范学院生命科学学院	42	139	7.0	9.0
2	刘莉	湖州师范学院生命科学学院	42	156	7.0	9.0
3	金佳丽	湖州师范学院生命科学学院	2	1	1.0	1.0
4	江晨	湖州师范学院生命科学学院	2	2	1.0	1.0
5	王改改	湖州师范学院生命科学学院	2	2	1.0	1.0
6	吴海丽	湖州师范学院生命科学学院	2	3	1.0	1.0
7	刘鹏	湖州师范学院生命科学学院	1	1	1.0	1.0