pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组载体构建及其对NIH3T3细胞增殖和凋亡研究

• 作者: 于萌 张梅英 徐影琪 杨葳 王惟 秦英 赵越 郑志红 郭晓冲
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DJ-1 NIH3T3细胞 帕金森 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 28-33
• 分类号: R332
• 字数: 4106字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2012.001.007

摘要

目的 构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础.方法 采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,并采用脂质体介导的方法分别将其转染入NIH3T3细胞,500 μg/mL G418压力筛选稳定克隆,对2种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinV-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测.结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1 M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1 -His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P＜0.05),转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别；细胞凋亡检测表明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH3Ｔ3阳性细胞组细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞(P＜0.05).结论 成功构建pcDNA3.1/myc-His- DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,成功筛选出稳定表达人DJ-1及DJ-1M26I的NIH3T3细胞.DJ-1M26I基因突变更易导致NIH3T3细胞的凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张梅英	中国医科大学实验动物部	41	186	7.0	12.0
2	王惟	中国医科大学实验动物部	15	25	3.0	4.0
3	赵越	中国医科大学实验动物部	81	268	9.0	13.0
4	杨葳	中国医科大学实验动物部	29	100	6.0	8.0
5	郭晓冲	中国医科大学实验动物部	12	53	5.0	7.0
6	徐影琪	中国医科大学实验动物部	3	3	1.0	1.0
7	于萌	中国医科大学实验动物部	9	22	3.0	4.0
8	秦英	中国医科大学实验动物部	12	74	5.0	8.0