pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞中表达

• 作者: 于萌 张梅英 徐影琪 杨葳 王惟 秦英 赵越 郑志红 郭晓冲
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: DJ-1 NIH3T3细胞 帕金森氏病
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 111-115
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3618字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.006

摘要

目的 构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I重组表达载体,为进一步研究DJ-1M26I基因的功能及建立转基因动物模型奠定基础.方法 采用突变试剂盒将第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I重组表达载体,采用脂质体转染的方法分别将pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的2种转染细胞在DNA水平、转录水平和蛋白质水平鉴定.结果 pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1 M26I质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,经PCR检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1 M26I基因的NIH3T3阳性细胞组增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P＜0.05).结论 成功构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1 M26I重组表达质载体.