抑癌基因FATS真核表达载体的构建及其定点突变

• 作者: 仇丽 李政 田寅 闫双双 马克
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 脆性位点相关的肿瘤抑制基因 定点突变 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 12-14
• 分类号: R730.49
• 字数: 2601字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2012.11.004

摘要

目的 构建抑癌基因FATS的真核表达载体和针对其单核苷酸多态性(SNP)位点定点突变的真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础.方法 通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA中扩增FATS基因,并克隆到p3 ×Flag-myc-CMV-26载体上,构建FATS真核表达载体p3×Flag-FATS；利用定点突变技术构建Hag-FATS-C213G,经测序检测突变结果后将两质粒分别转染FATS基因沉默的U20S细胞,Western blot检测FATS蛋白和标签蛋白表达.结果重组质粒p3×Flag-FATS经EcoR I/Kpn I双酶切出现质粒和目的片段两条带,且大小相符、无其他条带；编码FATS第213位氨基酸的第637-639位碱基由AAU突变为GAU,其他碱基均无突变；p3×Flag-FATS和Flag-FATS-C213G转染U20S细胞可检测出标签蛋白Flag和目的蛋白FATS表达.结论 FATS基因及其定点突变载体均可成功构建,且转染后表达良好；此为深入研究FATS基因的抑癌功能及与肿瘤发生风险的关系奠定了基础.