抗 CD20融合蛋白在 CHO 细胞中的表达及其纯化与鉴定

• 作者: 张连成 胡显文 赵子兰 邵勇 陈惠鹏 高丽华
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: CD20 B 细胞淋巴瘤 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 页码范围: 809-812
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 2963字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.06.009

摘要

目的:构建 CD20胞外区与 Igβ胞外区和人 IgG1 Fc 融合基因的表达载体,并在 CHO 细胞中表达.方法与结果:根据已知的 IgM 的 CH2区域和 Igβ胞外区序列,分别设计 PCR 引物并进行 PCR 扩增,然后用重叠 PCR 法扩增得到900 bp 的 Igβ-CH2序列,插入本实验室构建的 pIRIS-EGFP-Fc 载体,转化大肠杆菌,得到 pIRIS-Igβ-CH2-Fc 重组质粒,将其转染 CHO-K1细胞,在 G418抗性培养基中培养,荧光显微镜观察结合 ELISA 法筛选高表达细胞系,细胞系扩大培养后,通过亲和层析 rProtein A 柱纯化得到纯度融合蛋白,SDS-PAGE 显示目的蛋白去糖基化后,相对分子质量约为42×103.结论:得到了 Igβ-CH2-Fc 重链抗体样分子,并鉴定为糖蛋白;须进一步对所得蛋白的生物学活性进行检测,验证其是否能够通过胞外区蛋白定位于 B 细胞淋巴瘤细胞表面对 B 淋巴瘤细胞进行杀伤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
2	高丽华	军事医学科学院生物工程研究所	37	174	7.0	12.0
3	胡显文	军事医学科学院生物工程研究所	67	596	13.0	22.0
4	邵勇	军事医学科学院生物工程研究所	15	22	3.0	4.0
5	张连成	军事医学科学院生物工程研究所	6	6	2.0	2.0
6	赵子兰	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0