靶向克隆法构建pET15b-VP3原核表达载体

• 作者: 杨敬宁 柯贤柱 石小燕 蔡召忠 邓守恒 陈萍 黄永章
• 来源期刊: 成都医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: pET15b-VP3 靶向克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 393-395
• 分类号: Q78
• 字数: 2305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-2257.2012.03.015

摘要

目的 探索利用PCR产物靶向克隆法构建能够表达凋亡素的pET15b-VP3原核表达载体.方法 以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366 bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b,得到重组表达载体pET15b-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体.结果 PCR产物经过电泳鉴定可见366 bp特征性的VP3片段,重组质粒经双酶切电泳获得了一个大小为366 bp的VP3片段,重组质粒测序证实VP3 cDNA编码区成功地插入了pET15b,且其序列与GeneBank中VP3 cDNA序列完全一致.结论 靶向克隆法可快速,高效地构建pET15b-VP3原核表达载体,为进一步研究VP3药用价值奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓守恒	湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心	69	159	6.0	9.0
2	柯贤柱	湖北医药学院附属人民医院医务处	27	139	6.0	10.0
3	石小燕	武汉市中心医院实验中心	8	26	4.0	5.0
4	蔡召忠	湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心	10	34	4.0	5.0
5	杨敬宁	湖北医药学院免疫教研室	20	67	5.0	7.0
6	黄永章	湖北医药学院附属人民医院临床医学研究所	7	8	2.0	2.0
7	陈萍	湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心	93	360	9.0	14.0