慢病毒介导的RNA干扰技术构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型

• 作者: 刘玉川 李大伟 杨同磊 杨达宇 胡明 马远征 黄凤山
• 来源期刊: 中国骨伤
• 关键词: 椎间盘 慢病毒属 膜蛋白质类 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 842-845
• 页数: 4页
• 字数: 3262字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0034.2012.10.014

摘要

目的:构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型,为进一步研究EMP-1在椎间盘退变中的作用机制提供理想的研究平台.方法:利用慢病毒载体介导的小发夹状RNA (small hairpin RNA,shRNA)转入人胚胎肾细胞(293FT)包装慢病毒,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72h后收集病毒上清并感染人胚稚间盘髓核细胞,Western blot、RT-PCR鉴定基因干扰效果,凝胶成像分析软件对条带显色程度进行分析,得到EMP-1/GAPDH的平均值.结果:重组慢病毒滴度测定约为1×107 U/ml,感染靶细胞后得到EMP-1基因低表达细胞模型,EMP-1mRNA表达水平比正常细胞下降了50％.半定量RT-PCR结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.46±0.03降至0.32±0.01,Western blot结果显示EMP1/GAPDH的平均值由0.50±0.01降至0.25±0.01.结论:通过慢病毒包装技术,成功构建人胚椎间盘髓核上皮膜蛋白-1基因低表达细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡明	解放军第三○九医院骨科	39	331	10.0	15.0
2	马远征	解放军第三○九医院骨科	158	1326	17.0	26.0
3	黄凤山	解放军第三○九医院骨科	9	75	5.0	8.0
4	李大伟	解放军第三○九医院骨科	39	353	11.0	15.0
5	杨达宇	解放军第三○九医院骨科	9	106	6.0	9.0
6	刘玉川	解放军第三○九医院骨科	4	23	3.0	4.0
7	杨同磊	解放军第三○九医院骨科	3	17	2.0	3.0