真核载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2的构建、表达及功能鉴定

• 作者: 朱明媚
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PSD95-PDZ2 真核表达载体 构建 表达
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1377-1380
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2772字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含突触后密度蛋白-95(PSD95)的第2个盘状同源区域(PDZ2)的真核载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2,并检测其在鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)中的表达和功能.方法 采用RT-PCR法从小鼠神经元细胞的cDNA中,扩增出约309 bp的PSD95-PDZ2基因片段.用EcoRⅠ、BamH I将片段和载体pcDNA3.1双酶切后,酶切产物加入T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建真核表达载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2.用双酶切、DNA序列分析鉴定正确后,采用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000将其转染PC12细胞,IP法检测目的 片段在细胞中的表达与功能.结果 阳性克隆经双酶切法鉴定含有PSD95-PDZ2基因片段,基因测序结果与GenBank中序列相同.IP检测出11 ku大小的蛋白,证明目的 基因在PC12细胞中可以正常表达并与神经元性一氧化氮合酶(nNOS)结合.结论 真核载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2构建成功,目的 片段PSD95-PDZ2在PC12细胞中可正常表达并与nNOS结合,为进一步研究其作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱明媚	南京医科大学附属南京儿童医院药剂科	5	6	1.0	2.0