结核分枝杆菌Ag85A在毕赤酵母中的表达、纯化及酶联免疫斑点试验研究

• 作者: 冯丽萍 孙晓璐 张平静 李忠明 樊小英 汪成富
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 毕赤酵母 抗原Ag85A 酶联免疫斑点实验 细胞免疫
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 方法与技术
• 页码范围: 220-223,262
• 分类号: R378.91+1
• 语种: 中文

摘要

目的 利用毕赤酵母表达和纯化结核分枝杆菌Ag85A蛋白,以期得到高效刺激T淋巴记忆细胞产生γ-干扰素的特异性抗原.方法 用PCR扩增得到Ag85a基因,构建出重组质粒pPic9k-85a,通过电转化进入毕赤酵母,经遗传霉素G418抗性筛选、硫酸铵沉淀浓缩及离子交换层析纯化得到目的蛋白.最后以大肠杆菌和毕赤酵母表达的Ag85A分别为抗原刺激物进行酶联免疫斑点(Elispot)试验,分析其刺激BCG免疫小鼠T淋巴细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)的能力.结果 在毕赤酵母中成功克隆并稳定表达了Ag85A蛋白,Elispot检测结果表明,毕赤酵母比大肠杆菌产生的Ag85A蛋白,对小鼠T淋巴细胞的刺激效果更加明显(P＜0.05),能产生更多的免疫斑点.结论 毕赤酵母表达的Ag85A蛋白可以更高效的刺激T淋巴细胞,可用于检测结核杆菌感染诱导的细胞免疫应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪成富	苏州大学基础医学与生物科学院微生物学系	23	109	6.0	9.0
2	李忠明		7	10	3.0	3.0
3	樊小英	苏州大学基础医学与生物科学院微生物学系	5	5	1.0	2.0
4	张平静		3	3	1.0	1.0
5	冯丽萍	苏州大学基础医学与生物科学院微生物学系	2	0	0.0	0.0
6	孙晓璐	苏州大学基础医学与生物科学院微生物学系	2	0	0.0	0.0