携人PTHLH基因慢病毒表达载体的构建

• 作者: 姚开泰 李佳 樊英 陈靖 黄仲曦
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲状旁腺相关激素 pGC-FU 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 279-281
• 分类号: R739.63
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带人甲状旁腺相关激素(PTHLH)基因的慢病毒表达载体pGC-FU/PTHLH.方法 酶切载体pGC -FU,根据人PTHLH基因合成特定引物,扩增目的基因片段,将其克隆到pGC-FU质粒(含EGFP基因)上,菌落PCR鉴定及测序分析重组载体,使用Lipofectamine 2000诱导转染pGC-FU、pHelper 1.0和pHelper 2.0载体三质粒进入293T细胞包装慢病毒,并用带PTHLH的慢病毒感染293T细胞和鼻咽癌CEN1细胞确认慢病毒包装是否成功.结果 菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定显示,与理论预计值阳性转化子735 bp,阴性转化子198 bp基本相吻合；PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,结果完全匹配,进一步鉴定载体构建成功.分别将质粒包装系统共转染293T细胞,包装产生空白对照慢病毒( pGC- FU)和过表达PTHLH的慢病毒(pGC-FU /PTHLH);或用携带PTHLH和EGFP基因的病毒上清感染CNE1细胞,48 h后,倒置荧光显微镜下观察293T和CNE1细胞,均可见绿色荧光,转染成功.结论 成功构建携人PTHLH基因慢病毒表达载体,为进一步研究PTHLH基因在鼻咽癌转移中的作用及鼻咽癌发病分子机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚开泰	南方医科大学肿瘤研究所	65	406	11.0	16.0
2	黄仲曦	南方医科大学肿瘤研究所	13	59	6.0	7.0
3	李佳	南方医科大学肿瘤研究所	24	158	7.0	12.0
4	陈靖	南方医科大学肿瘤研究所	10	13	2.0	3.0
5	樊英	韶关学院医学院	3	8	1.0	2.0