真核表达载体pcDNA3.1/VEGF-B-EGFP的构建及在骨髓间质干细胞中的表达

• 作者: 张勇 王惠 王胜
• 来源期刊: 中华实用诊断与治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 真核表达载体 血管内皮生长因子B 骨髓间质干细胞
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 364-367
• 分类号: R393
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨血管内皮细胞生长因子B(vascular endothelial cell growth factor-B,VEGF-B)转染人骨髓间质干细胞(marrow mesenchyrnal stem cells,MSCs)的表达情况.方法 将VEGF-B及编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的互补脱氧核糖核酸(complementary deoxyribonucleic acid,cDNA)序列通过扩增、酶切、插入pcDNA 3.1质粒的多克隆位点,构建pcDNA 3.1/VEGF-B-EGFP真核表达质粒,应用脂质体介导的基因转染技术,将基因导入MSCs(pcDNA 3.1/VEGF-B-EGFP转染组)；应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况；流式细胞仪检测转染效率；逆转录-聚合酶链反应、蛋白印迹法检测VEGF-B的表达情况.结果 pcDNA 3.1/VEGF-B-EGFP转染组重组质粒转染MSCs 24 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光,流式细胞仪检测转染效率约为15％；RT-PCR检测结果显示,MSCs出现590 bp目的基因；Western blot检测显示,在转染后MSCs中有VEGF-B表达.结论 构建的VEGF-B真核表达质粒成功转染MSCs,为联合应用MSCs细胞移植和VEGF-B基因治疗心肌缺血的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王胜		12	36	3.0	6.0
2	王惠	济南军区总医院超声诊断科	72	299	10.0	14.0
3	张勇	济南军区总医院心外科	73	147	7.0	8.0