pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒构建腺相关病毒包装

• 作者: 任山 刁泽正 刘勇君 张志伟 徐鹏 房晶 燕国清 西永明 隋爱华
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 SOX9 转染 椎间盘细胞 病毒包装
• 年，卷（期）: 2012,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3759-3762
• 分类号: R318
• 字数: 870字
• 语种: 中文

摘要

背景:实验为基因治疗退变椎间盘实验的前期部分,旨在构建含免疫荧光的pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒并应用腺相关病毒包装,为后期体内外实验打下基础.目的:构建人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV- hSOX9-IRES- tdTomato的包装.方法:用酶切法将质粒pAAV-IRES- tdTomato和质粒pUC57- hSOX9连接成pAAV-hSOX9-IRES- tdTomato,用质粒共转染方法包装腺相关病毒,感染293AAV细胞,腺相关病毒纯化及用生物学滴度测定法进行滴度测定.结果与结论:经测序结果BLAST比对分析,pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato完全与合成的基因序列hSOX9相符,滴度为1×107TU/mL.结果表明,人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV-hSOX9-IRES- tdTomato包装成功.