pAAV-hBMP2-IRES质粒的构建及病毒包装

• 作者: 时志斌 王敏 石建峰 程政
• 来源期刊: 临床口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人骨形态发生蛋白 腺相关病毒 骨组织工程
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 13-15
• 页数: 3页
• 分类号: Q812
• 字数: 3157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-1634.2009.01.005

摘要

目的:构建含人骨形态发生蛋白2(hBMP2)基因的重组腺相关病毒载体.方法:根据hBMP-2基因序列设计引物,上游引入Sal Ⅰ酶切位点,下游引入EcoR Ⅰ酶切位点,以胚胎骨髓组织总RNA为模版进行rt-PCR反应扩增hBMP-2基因.将hBMP-2片段定向亚克隆进pAAV-IRES-GFP的MCS中,获得重组表达质粒(pAAV-hBMP2-IRES-GFP),采用磷酸钙沉淀法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染到AAV 293细胞,进行rAAV-hBMP2-IRES-GFP重组病毒包装.收获的病毒液按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀、氯仿反复抽提法浓缩纯化,采用荧光计数法测定重组病毒感染滴度.结果:酶切鉴定、测序结果表明,hBMP2成功克隆入pAAV-IRES-GFP载体中.在AAV 293细胞中包装出重组腺相关病毒载体的感染滴度为3.6×10<'11>/ml.结论:成功制备了rAAV-hBMP2载体,可满足骨组织工程的需要.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	时志斌	西安交通大学第二附属医院	86	835	15.0	26.0
2	王敏		108	817	14.0	26.0
3	程政		13	44	5.0	6.0
4	石建峰		28	97	6.0	7.0