rAAV-hBMP7的包装纯化及感染滴度的测定

• 作者: 张晨 李昂 石建峰 饶国洲 魏虹
• 来源期刊: 陕西医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 病毒 转染 骨形态发生蛋白质类/代谢 重组腺相关病毒
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 526-531
• 页数: 6页
• 分类号: R373
• 字数: 5282字
• 语种: 中文

摘要

目的:包装纯化具有感染性的腺相关病毒rAAV-hBMP7,检测其包装效率及感染滴度.方法:应用AAV Helper-Free System、磷酸钙三质粒共沉淀法,将病毒质粒pAAVIRES-hrGFP-hBMP7、辅助质粒pAAV-Helper和包装质粒pAAV-RC转染AAV-293细胞,进行病毒包装,荧光计数法测定病毒包装效率;反复冻融收获病毒液,按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀的方法浓缩纯化;纯化的病毒液感染AAV-HT1080细胞观测荧光表达,原位β-半乳糖苷酶染色测定病毒感染效率和滴度.结果:转染AAV-293细胞后6h即有绿色荧光表达,包装效率为94.16±0.13%.纯化的rAAV-hBMP7在HT1080细胞中的感染效率为78%,计算病毒物理滴度为2.34×1011v·g/ml.结论:磷酸钙三质粒共沉淀法可实现病毒在AAV-293细胞中的高效包装,纯化的rAAV病毒载体能介导hBMP7基因转染真核细胞并具有较高的转染效率和感染滴度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李昂		81	451	12.0	17.0
2	张晨	西安交通大学第二附属医院	66	337	12.0	15.0
3	魏虹		13	43	5.0	6.0
4	石建峰		28	97	6.0	7.0
5	饶国洲		64	326	9.0	14.0