SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化

• 作者: 万向 曹立亭 王秋菊 许李丽 马跃
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 随机单链DNA文库 正交试验设计 PCR 体系优化
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 3241-3242,3297
• 分类号: Q93-33
• 字数: 2539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2012.06.010

摘要

[目的]对SELEX技术中ssDNA文库的PCR扩增条件进行优化.[方法]采用L16 (45)正交试验设计在4个水平上对影响单链随机DNA文库PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶含量、引物浓度和随机单链DNA文库量5个重要因素进行了优化,同时对PCR反应的退火温度和循环次数进行了优化,确立最优反应体系和扩增程序.[结果]20μlPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer 2.0 μl,随机ssDNA文库0.5ng,Mg2+ 2.5 mmol/L,dNTP Mixture 0.25 mmol/L,上下游引物各0.6 μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U；退火温度为68℃,最佳循环数为12.此反应系统下,随机ssDNA文库PCR扩增谱带清晰、稳定、特异性高.[结论]为SELEX技术中筛选到特异性更强的适配子奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马跃	西南大学荣昌校区动物医学系	34	71	5.0	7.0
2	王秋菊	西南大学荣昌校区动物医学系	11	43	4.0	6.0
3	曹立亭	西南大学荣昌校区动物医学系	27	49	5.0	5.0
4	许李丽	西南大学荣昌校区动物医学系	6	14	3.0	3.0
5	万向	西南大学荣昌校区动物医学系	6	28	3.0	5.0