结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 周云 张岩 彭梅娟 李瑞娟 王素娜 白雪帆 谢玉梅 贾战生 郝春秋 马力 魏欣
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 结缔组织生长因子 RNA干扰 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 57-60
• 分类号: Q78
• 字数: 3094字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.01.013

摘要

目的:构建能介导结缔组织生长因子(CTGF)基因RNA干扰的复制缺陷型腺病毒表达载体.方法:以大鼠CTGF基因为靶序列,设计并合成含编码短发夹RNA序列的寡核苷酸,构建腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF,酶切及测序分析正确后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染AD-293细胞,进行病毒包装,得到腺病毒载体Ad.H1-CTGF,用该载体感染HSC-T6细胞,观察其对CTGF基因表达抑制的效果.结果:构建的腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF经酶切、测序分析证实正确;包装的病毒载体滴度为4×1010 PFU/mL,感染HSC-T6细胞后,Western印迹证实CTGF表达显著减少.结论:构建的腺病毒载体Ad.H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,为抗纤维化研究提供了有力的工具.