慢病毒载体系统介导hUC-MSC绿色荧光蛋白和荧光素酶共表达技术体系的建立

• 作者: 林凤锦 王庆华 王水良 王瑾 祝玲 谭建明 黄粱浒
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 慢病毒 脐带间充质干细胞 绿色荧光蛋白 荧光素酶 外源基因共表达
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 字数: 4019字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2013.03.002

摘要

目的 建立慢病毒载体系统介导的人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶共表达技术体系.方法 GFP和荧光素酶共表达慢病毒载体与相应包装质粒psPAX2和pMD2.G经聚乙烯亚胺介导共转染HEK293T细胞以包装病毒;病毒感染P4代hUC-MSC 12 h后,再行嘌呤霉素筛选24 h,普通光学显微镜观察细胞形态,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,IVIS Kinetic成像系统拍照以观察和记录慢病毒感染后hUC-MSC荧光素酶的表达情况;MTS法行细胞生长曲线作图,同时,普通和实时定量RT-PCR法检测细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF 1/CIP1的表达.采用方差分析和t检验进行统计学分析.结果 慢病毒感染并不会造成体外培养hUC-MSC形态的明显改变,而荧光显微镜和IVIS Kinetic成像系统的观察结果则分别证实,GFP和荧光素酶经慢病毒载体系统的介导可在hUC-MSC中成功地共表达.此外,细胞生长曲线作图结果表明,对照和GFP及荧光素酶共表达慢病毒感染后hUC-MSC的生长增殖速率相仿(P＞ 0.01);实时定量RT-PCR法检测结果则显示,与对照慢病毒感染相比,GFP和荧光素酶共表达慢病毒感染后其细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1和p21WAF1/C1P1 mRNA表达水平分别是对照组的1.11倍(P=0.130)、0.54倍(P=0.000)和0.78倍(P=0.005),表明外源GFP和荧光素酶共表达对体外培养的hUC-MSC生长增殖等表型无显著影响.结论慢病毒载体系统可有效介导外源基因在hUC-MSC中的表达;同时,GFP和荧光素酶在hUC-MSC中的共表达也将极大地方便其体内转归的示踪.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭建明		180	776	12.0	20.0
2	王水良	南京军区福州总医院福建省移植生物学重点实验室	19	46	4.0	6.0
3	王庆华	南京军区福州总医院福建省移植生物学重点实验室	42	203	7.0	12.0
4	王瑾	南京军区福州总医院福建省移植生物学重点实验室	5	29	3.0	5.0
5	黄粱浒	南京军区福州总医院福建省移植生物学重点实验室	5	10	2.0	3.0
6	林凤锦	南京军区福州总医院福建省移植生物学重点实验室	1	2	1.0	1.0
7	祝玲	南京军区福州总医院福建省移植生物学重点实验室	1	2	1.0	1.0