拟南芥Dof1基因原核表达载体的构建及应用

• 作者: 李昆志 王艺霖 赵丽伟
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Dof 转录因子 载体构建 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 195-202
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 5008字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建拟南芥转录因子Do f1基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体.[方法]利用RT-PCR方法从拟南芥中克隆转录因子Do f1基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组原核表达载体pET32a(+)-Dof1,经酶切鉴定和测序验证后将其转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后,纯化重组蛋白,以分离到的重组蛋白为抗原免疫小鼠制备抗血清,检测植物中Dof1蛋白表达水平.[结果]成功构建了拟南芥转录因子Do f1基因的原核表达载体pET32a(+)-Do f1,在28℃、1 mmol/L IPTG诱导6h的大肠杆菌中可高效表达分子质量约为42 ku的重组蛋白,其分泌到细胞质中,不形成包涵体；Western-blotting检测结果证明,制备的抗血清有较好的抗原-抗体识别反应.[结论]成功实现了Do f1基因的原核表达,制备出的重组蛋白Dof1多克隆抗体可用于植物Dof蛋白表达水平的检测,可为Do f1基因的进一步研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李昆志	昆明理工大学生物工程技术研究中心	73	471	13.0	16.0
2	赵丽伟	昆明理工大学生物工程技术研究中心	5	30	3.0	5.0
3	王艺霖	昆明理工大学生物工程技术研究中心	4	28	3.0	4.0