Rho鸟苷酸解离抑制因子-2过表达载体的构建与慢病毒包装

• 作者: 倪松石 刘华 张引子
• 来源期刊: 南通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 Rho鸟苷酸解离抑制因子-2 载体 过表达
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: R562.2+5
• 字数: 2297字
• 语种: 中文

摘要

目的:为研究β2肾上腺素能受体减敏的机制,构建Rho鸟苷酸解离抑制因子-2(Rho GDI2)过表达慢病毒载体.方法:GenBank搜索Rho-GDI2基因序列(Gene ID:14570,序列号:NM_008113),设计PCR引物扩增目的基因,双酶切后凝胶电泳回收酶切产物.质粒双酶切获得线性载体,将目的基因和线性载体进行琼脂糖凝胶电泳分离回收目的条带.再行目的基因和载体的连接,连接产物转化感受态细胞;菌液PCR阳性克隆鉴定并抽提质粒并测序.最后293T细胞内包装慢病毒质粒并测其病毒活力与滴度.结果:通过DNAStar SeqMan软件对测序结果进行分析,测序结果与目标序列一致.病毒质粒转染细胞效率较高,病毒活力较高,通过标准曲线测得病毒滴度pLenti-GDI慢病毒液:1.22×108 vp/mL.结论:成功构建了Rho GDI2过表达慢病毒载体.