烟曲霉脯氨酰内肽酶在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达与重组酶性质

• 作者: SINGH Suren 仝征 李宁环 樊游 沈微 王正祥 陈献忠
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 烟曲霉 脯氨酰内肽酶 诱导表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 工业微生物
• 页码范围: 391-399
• 语种: 中文

摘要

[目的]研究烟曲霉脯氨酰内肽酶cDNA基因的异源表达及重组酶性质.[方法]以烟曲霉CICIMF0044总RNA为模板,反转录合成cDNA;再以cDNA为模板,通过PCR扩增去除自身信号肽的脯氨酰内肽酶基因,构建表达载体pPIC9K-PEP;电转化酵母宿主菌Pichia pastoris GS 115,获得重组菌PEP-09;纯化并分析重组酶性质.[结果]重组菌摇瓶发酵酶活力最高可达647.3 U/L.表达产物纯化后的分子量为63 kD左右.重组酶最适反应温度为65℃,有较好的温度稳定性,在55℃保温8h能保留90％以上的酶活力.该酶最适pH为5.5,在pH 3.0-9.0范围内有很好稳定性,在pH 6.0-8.0的缓冲液中37℃保温10 d酶活没有明显变化.[结论]烟曲霉脯氨酰内肽酶cDNA基因在巴斯德毕赤酵母中实现了分泌表达,重组酶活性稳定,有一定的应用潜力.