黑曲霉脯氨酸蛋白内肽酶基因的克隆及其在酵母中的表达

• 作者: 向先长 李玉 杨迪 路福平 高艳玲
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 工学
• 关键词: 黑曲霉 脯氨酸蛋白内肽酶 毕赤酵母 诱导表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: TS2
• 字数: 4135字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2009.02.002

摘要

以A.niger TCCC41013总RNA为模板,通过RT-PCR扩增含自身信号肽的脯氨酸蛋白内肽酶基因pep,将其克隆到pUCm-T载体上进行测序.测序结果表明基因全长1581bp,共编码526个氨基酸,包括22个氨基酸的信号肽序列和504个氨基酸的成熟肽序列.通过生物信息学方法对蛋白质的理化性质进行分析预测,脯氨酸蛋白内肽酶等电点为4.43,具有丝氨酸活性中心,属丝氨酸羧肽酶S28家族.以重组质粒pUCm-T-pep为模板,通过PCR扩增去除自身信号肽的pep,构建毕赤酵母表达载体pPIC9-pep,电转酵母宿主菌GS115.SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量为60000Da左右,酶特异性底物法测定酶活力最高可达2275.4 mU/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	路福平	天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院	42	314	10.0	14.0
2	李玉	天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院	12	60	4.0	7.0
3	杨迪	天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院	4	16	2.0	4.0
4	向先长	天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院	3	8	2.0	2.0
5	高艳玲	天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院	3	13	2.0	3.0