斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测

• 作者: 冯德峰 吴秀山 戴国 盛力翔 罗世锋 莫小阳
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Fbxl5 融合蛋白 多克隆抗体 基因芯片
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 249-256
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 5516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2013.03.010

摘要

Fbxl5为F-box基因家族的一员,目前研究发现其与心脏的发育有关.为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体.通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片段,将其克隆入表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌Rosseta中.用IPTG诱导Fbxl5重组质粒得到His-Fbxl5的融合蛋白.这个融合蛋白用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的His-Fbxl5融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.使用Western Blot检测,获得了Fbxl5原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Fbxl5多克隆抗体.随后检测了Fbxl5在斑马鱼胚胎和成体组织中蛋白的表达,通过基因芯片分析在Fbxl5-MO和Std胚胎样品的mRNA含量差异.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Fbxl5多克隆抗体,为Fbxl5功能的进一步研究奠定了基础.