Beclin1基因siRNA慢病毒载体构建和鉴定

• 作者: 伍钢 周云 樊红琨 王文玉 赵国强
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Beclin1基因 siRNA慢病毒载体 RNA干扰 A549细胞
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 131-135
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文

摘要

本研究通过慢病毒载体(pRNAT-U6.2/Lenti)构建靶向Beclin1基因的RNA干扰(RNAi)重组体,用以建立Beclin1基因稳定沉默的非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞株.PCR鉴定结果显示3个扩增的阳性片段均已插入pRNAT-U6.2/Lenti载体；测序结果证明3个重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/Lenti-si356、pRNAT-U6.2/Lentisi423和pRNAT-U6.2/Lenti-si684的插入序列完全正确；重组慢病毒载体感染A549细胞后,RT-PCR和Westernblot检测结果均证实3组重组体感染的细胞内Beclin1 mRNA和蛋白表达都受到不同程度的抑制,Beclin1 mRNA的沉默效率分别为35.56％、89.22％和66.78％.结果显示成功构建了Beclin1基因的RNAi病毒重组载体,并建立了其稳定表达的NSCLC A549细胞株,为探讨Beclin1基因对NSCLCA549细胞生物学行为的影响提供了新的细胞模型.