携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达

• 作者: 姜云波 张巍 徐元基 李云奇 林晓亮 殷小涛 田仁礼 赵倩 阎瑾琦
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: p53调节的凋亡诱导蛋白1 腺病毒载体 HeLa细胞 基因治疗
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1082-1086
• 分类号: R392.12|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1 (p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达.方法 设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1；在LipofectamineTM 2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGlox△E1,3Cre共转染进HEK293细胞；通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1).将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达.结果 基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致.Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达.结论 成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力.