绵羊AMH基因的克隆、序列分析与原核表达

• 作者: 刘莉 古丽米热·阿不都热依木 吴阳升 张利 杨楠 林嘉鹏 汪立芹 蒋香菊 黄俊成
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 AMH基因 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1386-1392
• 页数: 7页
• 分类号: S826.2
• 字数: 5433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.06.032

摘要

旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析.以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分析.根据预测的编码区氨基末端260氨基酸对应的序列设计表达引物,构建原核表达载体pET15 b-oamh260,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.序列分析结果表明,获得的绵羊AMH基因序列全长1 797 bp(GenBank登录号:KC986978),完整开放阅读框为1 728 bp,共编码575个氨基酸,氨基末端24个氨基酸为信号肽序列,羧基末端区域TGFβ家族保守区,全序列与牛AMH的同源性为95.80％.SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达的融合蛋白大小为30 000,与预期蛋白质大小一致.Western blot检测结果显示,该蛋白质为His融合蛋白.以上结果表明该试验成功克隆了绵羊AMH基因的完整编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.