慢病毒载体转录通读率检测方法的建立

• 作者: 何佳平 孙凤强 张帆 张敬之 方彧聃 王娟
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 慢病毒载体 自灭活慢病毒载体 转录通读率 安全性
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术方法
• 页码范围: 1006-1015
• 语种: 中文

摘要

慢病毒载体作为一种有效的生物研究和基因治疗载体,近年来正受到广泛关注,而转录通读现象则是限制其被使用的主要生物安全性瓶颈之一.为了评估慢病毒载体在整合入染色体后的转录通读的实际情况,需要建立一种有效的检测转录通读率的方法.文中运用分子生物学等手段,将相关质粒瞬时转染入293T细胞,模拟野生型和自灭活型慢病毒载体整合入染色体后的情况,利用实时荧光定量PCR分别定量转录通读和总转录本在慢病毒载体上的特征序列,并计算出转录通读率；同时使用流式细胞计数等技术,检测转录通读后的GFP蛋白产物.两种检测结果均与理论相符,即自灭活型载体具有更高的转录通读率.说明文中所建立的方法有效可靠,为进一步评估和降低慢病毒载体的转录通读率,提高慢病毒载体的生物安全性的研究提供技术支持.