重组EGFP-aquaporin-4融合蛋白真核表达载体的构建及其在FRT细胞中的表达和定位

• 作者: 刘磊 孔繁利 李凤娥 李艳 藏雨轩 郝峰 马睿泽
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: aquaporin-4 转染 FRT细胞 载体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 273-277,后插2
• 页数: 6页
• 分类号: R361
• 字数: 3850字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130218

摘要

目的:构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-aquaporin-4,以EGFP示踪aquaporin-4在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRT细胞)中的表达和定位,为进一步研究aquaporin-4提供实验依据.方法:应用RT-PCR方法获得aquaporin-4编码区基因,克隆入真核表达载体pEGFP-N1.经酶切和测序鉴定证实为aquaporin-4后,Lipofectamine 2000脂质体转染重组EGFP-aquaporin-4融合蛋白真核表达载体至FRT细胞中,倒置荧光显微镜下观察aquaporin-4在FRT细胞中的表达和分布,并应用Western blotting法检测aquaporin-4蛋白的表达.同时检测转入FRT细胞内钙黄绿素的相对荧光强度以判断FRT细胞水通透性的状况.结果:EcoR Ⅰ和KpnⅠ双酶切和测序重组载体结果证实目的基因aquaporin-4成功克隆到真核表达载体pEGFP-N1中.荧光显微镜下观察融合EGFP的aquaporin-4主要在FRT细胞膜上表达；Western blotting结果证实脂质体转染重组载体的FRT细胞表达aquaporin-4.转染重组EGFP-aquaporin-4融合蛋白真核表达载体的FRT细胞水通透性显著高于未转染的FRT细胞,其水通透性是未转染FRT细胞的1.65倍.结论:成功构建aquaporin-4真核表达载体,证实其可在FRT细胞中表达,并具有明显的膜蛋白特性和良好水通透性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔繁利	北华大学基础医学院	18	41	4.0	5.0