干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达

• 作者: 张丽君 李艳晖 王妍 解桂秋 黄志立
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 干扰素β1a 真核细胞 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 204-208
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 3724字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130203

摘要

目的:构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系,探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果.方法:采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因,并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰,合成的基因经PCR扩增,连接入pSV2-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a.将质粒转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株；提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定.收集细胞培养上清液,采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFN-β1a的抗病毒活性.结果:重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β 1a经PCR及双酶切鉴定证明构建正确；以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFN-β1a基因；转染后重组细胞表达的IFN-β1a具有抗病毒活性,达到3×105 IU·mL-1.结论:IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功,并在CHO细胞中成功表达了具有较高生物学活性的IFN-β1a蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄志立	深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院	28	218	8.0	14.0
2	王妍	深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院	32	64	4.0	6.0
4	张丽君	深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院	55	402	10.0	17.0
5	解桂秋	吉林大学药学院基因工程教研室	6	5	1.0	1.0
8	李艳晖	深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院	4	5	1.0	1.0