腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2)过表达载体的构建与鉴定

• 作者: 付常振 刘扬 成功 昝林森 王嘉力 王虹
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 秦川牛 固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2) 胆固醇 腺病毒
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 993-1001
• 页数: 9页
• 字数: 6011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.08.013

摘要

固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein 2,SREBP2)属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,在胆固醇的代谢过程中具有重要的调控作用.克隆秦川牛(Bos taurus)的SREBP2基因并构建相应腺病毒过表达载体,包装扩繁获得高滴度腺病毒,对于在细胞水平上研究SREBP2基因的功能和作用机制具有重要作用.本研究以秦川牛脂肪组织为实验材料,提取总RNA并反转录为cDNA,依据GenBank收录的牛的SREBP2基因(Accession NO.NM_001205600)mRNA序列设计引物,克隆出SREBP2基因编码区(coding sequence,CDS)全长.将SREBP2基因与穿梭载体连接构建pAdTrack-CMV-SREBP2表达载体,用PmeⅠ分别酶切线性化pAdTrack-CMV-SREBP2和空白对照pAdTrack-CMV载体并转化含有骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态进行同源重组,得到腺病毒重组载体pAd-SREBP2和pAd-CMV,分别用Pac Ⅰ酶切后胶回收DNA大片段,并将回收产物转染293A细胞包装得到腺病毒Ad-SREBP2和Ad-CMV,增殖并提高病毒滴度,得到高滴度病毒后,用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记法测定显示Ad-SREBP2和Ad-CMV的病毒滴度分别为7×108和1.3×109 GFU/mL.将Ad-SREBP2和Ad-CMV腺病毒侵染秦川牛前体脂肪细胞检测病毒的有效性,实时定量PCR检测结果显示,侵染48h时SREBP2基因的表达量提高了102.3倍.本研究成功克隆了秦川牛的SREBP2基因,构建了病毒重组体,包装增殖获得了高滴度病毒,为在细胞水平上基因功能的研究提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘扬	西北农林科技大学动物科技学院	12	65	4.0	8.0
2	成功	西北农林科技大学动物科技学院	7	10	2.0	2.0
3	王虹	西北农林科技大学动物科技学院	4	33	2.0	4.0
4	付常振	西北农林科技大学动物科技学院	7	30	3.0	5.0
5	王嘉力	西北农林科技大学动物科技学院	2	10	1.0	2.0