日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因克隆及表达载体的构建

• 作者: 曾智勇 李春燕 汤德元 王凤 罗险峰 马萍
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 生物学
• 关键词: 日本乙型脑炎病毒 贵州分离株 NS1基因 表达载体 构建
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 90-93
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV) NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)载体连接并转化入感受态细胞Top10中,构建原核表达载体pET32a(+)-NS1和真核表达载体pcDNA3.1(+)-NS1,并将NS1基因插入已经构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-2上,构建以IL-2融合表达的真核载体pcDNA3.1(+)-IL-2-NS1,分别通过抽提阳性质粒酶切鉴定和测序后,应用DNAStar等生物软件进行序列分析,最后进行原核表达载体和真核表达载体双酶切及测序.结果表明:JEV GZ株NS1 cDNA全长为1 245 bp,可编码415个氨基酸.说明JEV GZ株NS1 cDNA克隆成功,JEV GZ株NS1基因的原核表达载体、真核表达载体以及IL-2融合表达的真核载体构建成功.