Rheb突变体重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 侯敬申 叶永斌 赵莉 邹镇洪
• 来源期刊: 泰山医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: Rheb 腺病毒载体 乳腺癌 MCF-7 MDA-MB-231
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 721-724
• 页数: 4页
• 分类号: R73-3
• 字数: 3153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7115.2013.10.001

摘要

目的 构建携带野生型Rheb(WT)和Rheb突变体(持续活化型Q64L和显性失活型D60K)重组腺病毒载体,验证其携带的Rheb WT和Rheb突变基因在MCF-7细胞中的表达情况及其对血清饥饿的乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.方法 采用细胞内同源重组法构建携带Rheb和Rheb突变体的重组腺病毒载体pacAd5 CMV-Rheb,PCR法检测病毒上清;将病毒上清感染MCF-7细胞后Western blotting (WB)检测Rheb及下游产物表达.将重组腺病毒感染血清饥饿的乳腺癌细胞MDA-MB-231并观察细胞增殖情况.结果 酶切、测序及PCR表明构建的重组腺病毒载体携带Rheb和Rheb突变基因.重组腺病毒体外感染MCF-7细胞,WB检测到腺病毒感染的MCF-7细胞内Rheb蛋白表达较对照组明显增高,S6及β-actin蛋白的表达在各组间没有统计学差异.转染Rheb WT和Q64L组MCF-7细胞的P-S6表达较对照组和D60K组显著增高.无血清培养条件下,感染Rheb Q64L组的乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖能力较对照组及WT组强,而转染D60K组则较其他三组(EGFP、WT和Q64L组)的细胞增殖明显减弱.结论 成功构建野生型Rheb和Rheb突变体重组腺病毒质粒,为体内外进一步研究Rheb基因对乳腺癌的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶永斌	南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室	3	10	2.0	3.0
2	赵莉	广州医科大学药学院蛇毒研究所	17	25	3.0	3.0
3	侯敬申	广州医科大学附属第二医院急诊外科	7	9	2.0	3.0
4	邹镇洪	南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室	4	42	3.0	4.0