重组人B细胞激活因子融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 侯春梅 冯健男 彭辉 林周 沈倍奋 王茹 魏化伟 黎燕
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: B细胞激活因子 受体 三聚体 相互作用 细胞增殖 表达纯化
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 91-96
• 页数: 6页
• 分类号: Q51
• 字数: 4935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.02.003

摘要

目的 获得人类B细胞激活因子(B cell activating factor,BAFF)胞外段融合蛋白并对其生物活性进行分析.方法 构建pET32a/BAFF的原核表达载体,进行原核表达、亲和纯化,并通过SDS-PAGE、Western印迹进行鉴定.利用非还原电泳后的Western印迹与HPLC分析融合蛋白在溶液中的存在形式.ELISA、Octet RED系统检测rhBAFF结合受体TACI的能力并做出实时动力学分析.MTS法检测rhBAFF促进B细胞增殖的活性.结果 融合蛋白在大肠杆菌BL21中以可溶形式高效表达,经Ni-NTA纯化获得的目的蛋白纯度超过90％；SDS-PAGE、Western 印迹显示在相对分子质量为36×103位置有目的蛋白的特异条带；非还原电泳及HPLC分析表明,重组蛋白以三聚体的形式存在；ELISA、Octet RED系统同时证实BAFF可与受体TACI结合；增殖实验证实重组蛋白具有生物学活性.结论 成功获得纯度超过90％的rhBAFF可溶蛋白,实验证实为具有生物学活性的三聚体结构.