重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选

• 作者: 万敏 吴柒柱 张永胜 王丽颖 胡小平 苏雅拉图 陈宇杰
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 干扰素β 原核表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 841-846
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130442

摘要

目的:通过重组小鼠干扰素β(IFN-β)原核表达载体的构建及对包涵体溶解条件的筛选,建立IFN-β原核表达模型,为筛选适合的包涵体溶解条件提供实验依据.方法:小鼠新鲜肝组织中提取DNA,传统方法构建小鼠IFN-β原核表达载体并命名为IFN-β'.SDS-PAGE检测以传统方法、pH环境、溶解液成分、干菌与溶解液比例、溶解温度和溶解时间的改变对包涵体溶解效果的影响.结果:IFN-β'成熟蛋白鉴定结果与预测结果吻合,诱导表达正常.改变pH值、在溶解液中加入DTT对包涵体溶解效果无影响,包涵体经洗涤液洗涤后亦不能被溶解液所溶解,温度对包涵体溶解几乎无影响,溶解液的比例由1 g菌∶5mL溶解液增加为1 g菌∶20 mL溶解液时能溶解部分IFN-β'蛋白包涵体.结论:成功构建重组小鼠IFN-β原核表达载体,其蛋白以包涵体形式存在,且不易被溶解,在筛选的包涵体溶解条件中仅溶解液比例为影响包涵体蛋白溶解条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丽颖	吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室	82	282	9.0	13.0
2	胡小平	吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室	5	20	3.0	4.0
3	张永胜	吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室	9	58	4.0	7.0
4	陈宇杰	内蒙古民族大学生命科学学院	14	46	4.0	6.0
5	万敏	吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学教研室	24	116	5.0	10.0
6	苏雅拉图	内蒙古民族大学生命科学学院	25	44	4.0	5.0